摘要
連續(xù)稀釋度是各種生物實(shí)驗(yàn)的重要組成部分。例如，生成DNA、蛋白質(zhì)或細(xì)胞培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線需要以恒定的稀釋系數(shù)稀釋樣品的用例。在這里，我們提出了一種替代執(zhí)行這些重復(fù)步驟的手動(dòng)移液。opentronOT-2機(jī)器人可以在大約2分鐘內(nèi)連續(xù)稀釋8個(gè)樣品，稀釋10次在復(fù)制之間具有很高的可靠性。的的系數(shù)所表示的精度每列的差異與更昂貴的液體處理平臺(tái)相當(dāng)。我們鼓勵(lì)用戶根據(jù)其特定的科學(xué)應(yīng)用程序調(diào)整所附的參數(shù)化協(xié)議。

介紹
連續(xù)稀釋既是獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)，也是更復(fù)雜的實(shí)驗(yàn)管道的構(gòu)件。應(yīng)用可以是簡(jiǎn)單地生成一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線或更復(fù)雜的表型表征跨細(xì)胞培養(yǎng)濃度。在任何應(yīng)用中，都需要精確的移液才能產(chǎn)生可靠的結(jié)果。一般來說，人工實(shí)驗(yàn)室工作可以在協(xié)議中的任何移液步驟中引入隨機(jī)錯(cuò)誤。這些移液不準(zhǔn)確可以包含不正確的稀釋因子sampIes.移液管的混合速度和尖端高度可以提高精度，但在手動(dòng)移液的過程中，要保持不變卻具有挑戰(zhàn)性。此外，重復(fù)移液隨著時(shí)間的推移，重復(fù)移液會(huì)加重?fù)p傷。OT-2是一種替代選擇以確保移液的可靠性和最終的連續(xù)稀釋實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)質(zhì)量。

材料
-2液體處理機(jī)器人
-2軟件版本3.1.2
-光電管p300多通道移液管
-視中心300μLTip機(jī)架
-美國(guó)科學(xué)12-channeI自動(dòng)化水庫（1061-8150）
-康寧96井EIA/RIA易清洗tm透明平底聚苯乙烯（3368）
-康寧500 mL分子生物學(xué)級(jí)水（46-000-CV）
-麥考密克公司提供的各種食品顏色和雞蛋染料-藍(lán)色

• Tecan無限F200 pro

協(xié)議
1.用50μL藍(lán)色食用染料和10 mL分子生物學(xué)級(jí)水制備藍(lán)色染料溶液。
2.將200μL的藍(lán)色染料溶液加入到96-weIIlat底部釘劑的A1-H1的weIIs中。
3.在槽式儲(chǔ)層的A1孔中加入20 mL稀釋劑。
注：最后一次稀釋后的列是空白區(qū)域的默認(rèn)位置。槽/儲(chǔ)層的最后一口井是默認(rèn)的液體垃圾。
4.根據(jù)圖1a中的甲板布局，在插槽1-3中布置實(shí)驗(yàn)室餐具。
-插槽1=視中心300μLtip機(jī)架
-槽2=12通道水庫

• SIot 3 = 96-weIIlat底部釘
  5.請(qǐng)將協(xié)議中的參數(shù)更改為以下參數(shù)：
  -稀釋因子=為1.5
  -最終卷= 200
  -稀釋次數(shù)= 10
  6.繼續(xù)轉(zhuǎn)到OT-2運(yùn)行應(yīng)用程序，上傳您的協(xié)議并校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室軟件。
  7.密封平板，并量化吸光度在450 nm，每針閱讀器25睫毛。

結(jié)果
圖1的frst6柱的平均原始吸光度值如圖2所示。每一列顯示比前一列稀釋1.5倍。方差的一致性（CV%）說明了在重復(fù)之間的高可靠性。表1顯示了每個(gè)稀釋板的柱狀CV%。每個(gè)柱的平均精度約為2%，與使用比OT-2昂貴得多的液體處理器進(jìn)行的類似實(shí)驗(yàn)的值相當(dāng)1.每個(gè)連續(xù)稀釋板在大約2分鐘內(nèi)在OT-2上完成。

結(jié)論
在這里，我們提出了一個(gè)簡(jiǎn)單的連續(xù)稀釋實(shí)驗(yàn)，說明了OT-2液體處理機(jī)器人的高精度移液。除了精度外，OT-2還能夠進(jìn)行高度可定制的移液技術(shù)。用戶可以優(yōu)化抽吸/分配速度，混合速度，空氣間隙和許多其他選項(xiàng)，以更準(zhǔn)確和更有效的液體處理。自動(dòng)連續(xù)稀釋將為科學(xué)家提供可靠的移液系統(tǒng)，以及寶貴的步行時(shí)間，從繁瑣、容易出錯(cuò)的手工工作。