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DNA稀釋

一種降低DNA濃度的方法,以更好地適應(yīng)各種生物學(xué)程序,如聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)、DNA測序、分子克隆和實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)(qPCR)。

稀釋 DNA 通常是通過標(biāo)準(zhǔn)稀釋、系列稀釋或使用分光光度計(jì)進(jìn)行的,對精度和準(zhǔn)確性要求很高,人工移液面臨的挑戰(zhàn)包括不準(zhǔn)確、DNA 降解和交叉污染。通過液體處理系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)自動化可提高準(zhǔn)確性、可重復(fù)性、效率和吞吐量,同時(shí)降低污染風(fēng)險(xiǎn),從而改善流程。

稀釋 DNA 的工作流程

各種工作流程都需要稀釋 DNA,例如:

  1. 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) (PCR):PCR 需要特定濃度的 DNA 作為起始材料
  2. DNA 測序:Sanger 和下一代測序(NGS) 都需要特定的 DNA 濃度
  3. 分子克隆:DNA稀釋對于優(yōu)化連接反應(yīng)是必要的
  4. 定量 PCR (qPCR):與 PCR 類似,qPCR 需要最佳 DNA 濃度才能進(jìn)行準(zhǔn)確定量。

DNA 稀釋從未如此簡單

OT-2 是一款臺式液體處理器,其設(shè)計(jì)足夠方便且靈活,可以自動化許多常見的應(yīng)用。

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稀釋 DNA 的最佳方法1.  標(biāo)準(zhǔn)稀釋: 將特定體積的 DNA 添加到緩沖溶液中以降低濃度。
2. 連續(xù)稀釋: 在此過程中,先進(jìn)行初始稀釋,然后逐步進(jìn)行進(jìn)一步稀釋。這允許使用一系列濃度來優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件。3.  使用分光光度計(jì)稀釋:使用分光光度計(jì)測量DNA濃度,然后使用緩沖溶液將DNA稀釋至所需濃度。

協(xié)議聚焦

Opentrons 可幫助您使用 OT-2和 Opentrons Flex 的開源協(xié)議自動進(jìn)行 DNA 稀釋

為何稀釋 DNA 如此困難?

由于需要精確度和準(zhǔn)確度,稀釋 DNA 可能具有挑戰(zhàn)性。測量中的小錯誤可能會導(dǎo)致最終 DNA 濃度的顯著差異,從而影響下游應(yīng)用。此外,DNA 容易降解和污染,這可能發(fā)生在稀釋過程中。

使用手動移液稀釋 DNA 的主要挑戰(zhàn)

  1. 不準(zhǔn)確和不精確:移液時(shí)的細(xì)微差別可能會導(dǎo)致 DNA 濃度出現(xiàn)重大差異。
  2. DNA 降解:如果處理不當(dāng),DNA 可能會在此過程中降解。
  3. 交叉污染:如果移液器沒有正確清潔,則存在交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)。

自動化 DNA 稀釋過程

自動化液體處理系統(tǒng)可用于自動化 DNA 稀釋過程。這些機(jī)器可以準(zhǔn)確分配精確量的 DNA 和稀釋劑,從而降低人為錯誤的風(fēng),險(xiǎn)并提高可重復(fù)性。自動化方案可以輕松調(diào)整以創(chuàng)建一系列 DNA 濃度。

自動化比手動移液稀釋 DNA 的優(yōu)勢

  1. 提高精確度和準(zhǔn)確性: 與手動移液相比,自動化系統(tǒng)能更精確地處理極小體積和高濃度的 DNA。
  2. 時(shí)間效率高: 自動化系統(tǒng)可同時(shí)稀釋多個(gè)樣本,大大減少了稀釋過程所花費(fèi)的時(shí)間。
  3. 降低污染風(fēng)險(xiǎn):自動化系統(tǒng)可將交叉污染和 DNA 降解的風(fēng)險(xiǎn)降至最低。

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