NGS自動(dòng)化建庫(kù)是指利用自動(dòng)化技術(shù)和設(shè)備，對(duì)DNA或RNA樣本進(jìn)行高通量、高效率、高精度的文庫(kù)構(gòu)建過(guò)程。這一過(guò)程涵蓋了從樣本處理、DNA/RNA提取、文庫(kù)構(gòu)建到質(zhì)控等多個(gè)環(huán)節(jié)，旨在減少人工操作，提高實(shí)驗(yàn)效率和準(zhǔn)確性。

一、樣本準(zhǔn)備與DNA/RNA提取

1、樣本收集：收集目標(biāo)樣本，如細(xì)胞、組織、血液等，確保樣本的完整性和代表性。

2、樣本處理：根據(jù)樣本類型選擇合適的處理方法，如細(xì)胞裂解、組織研磨等，以釋放DNA或RNA。

3、DNA/RNA提?。翰捎煤线m的提取方法（如酚氯仿法、磁珠法、柱子法等）從樣本中純化出高質(zhì)量的DNA或RNA。

二、文庫(kù)構(gòu)建

文庫(kù)構(gòu)建是NGS自動(dòng)化建庫(kù)的核心步驟，通常包括以下子步驟：

1、DNA/RNA片段化：

1>將DNA或RNA分子切割成較小的片段，以便進(jìn)行后續(xù)的測(cè)序反應(yīng)。片段化可以通過(guò)物理方法（如超聲波破碎）或化學(xué)方法實(shí)現(xiàn)。

2>片段大小通常在100-1000堿基對(duì)之間，具體取決于測(cè)序平臺(tái)和實(shí)驗(yàn)需求。

2、末端修復(fù)和加A尾：

1>對(duì)片段化的DNA或RNA進(jìn)行末端修復(fù)，以去除末端損傷并添加磷酸基團(tuán)和3’末端A尾。這些修復(fù)步驟有助于后續(xù)的連接適配體和文庫(kù)擴(kuò)增。

3、連接適配體：

1>將經(jīng)過(guò)修復(fù)的DNA或RNA片段連接到特定的適配體（也稱為接頭）上。適配體是含有特定序列的DNA或RNA片段，用于后續(xù)的PCR擴(kuò)增和測(cè)序反應(yīng)。

2>在自動(dòng)化建庫(kù)過(guò)程中，這一步驟通常通過(guò)自動(dòng)化的移液和連接反應(yīng)實(shí)現(xiàn)。

4、文庫(kù)擴(kuò)增：

1>通過(guò)PCR擴(kuò)增將連接了適配體的DNA或RNA片段擴(kuò)增至足夠數(shù)量，以形成可用于測(cè)序的文庫(kù)。

2>擴(kuò)增過(guò)程中使用具有適配體序列的引物進(jìn)行特異性擴(kuò)增。

三、文庫(kù)質(zhì)控

文庫(kù)質(zhì)控是確保文庫(kù)質(zhì)量和測(cè)序結(jié)果可靠性的重要步驟。常用的文庫(kù)質(zhì)控方法包括：

1、定量PCR：用于檢測(cè)文庫(kù)的濃度和擴(kuò)增效率。

2、聚丙烯酰胺凝膠電泳：用于評(píng)估文庫(kù)片段的大小分布。

3、質(zhì)譜分析：用于進(jìn)一步驗(yàn)證文庫(kù)的質(zhì)量和純度。

四、功能：

1、自動(dòng)化操作：通過(guò)自動(dòng)化設(shè)備實(shí)現(xiàn)樣本處理、文庫(kù)構(gòu)建等步驟的自動(dòng)化，減少人工干預(yù)。

2、提高效率：自動(dòng)化流程縮短了實(shí)驗(yàn)周期，提高了實(shí)驗(yàn)效率。

3、降低誤差：減少人為操作帶來(lái)的誤差，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。