在生物科學的廣闊領域中，聚合酶鏈反應（PCR）一直是分子生物學實驗的重要工具。這種技術能夠快速復制微量的DNA樣本，為后續(xù)的研究提供了堅實的基礎。結合了先進的機器人技術和精準的溫控系的Opentrons Flex PCR工作站，使得PCR擴增變得更加穩(wěn)定和可靠。無論是剛?cè)腴T的學生還是經(jīng)驗豐富的科研人員，這個平臺都能幫助他們輕松實現(xiàn)高效且準確的PCR擴增。

Opentrons Flex PCR 工作站

一、實驗準備階段
1、設計引物：
根據(jù)目標DNA序列，利用專業(yè)的引物設計軟件設計出合適的引物對。
引物設計需考慮特異性、長度、GC含量以及退火溫度等因素。
2、準備模板DNA：
提取所需的DNA模板，并測定其濃度和純度。
確保模板DNA的濃度和純度滿足PCR反應的要求。
3、配制PCR反應體系：
根據(jù)實驗需求，準備PCR反應混合液，包括DNA模板、引物、dNTPs（脫氧核苷三磷酸）、PCR緩沖液、MgCl?（如需要）、Taq DNA聚合酶等。
將所有成分按一定比例混合均勻，并分裝到PCR管中。

二、樣品裝載與儀器設置階段
1、預熱Opentrons Flex PCR工作站：
打開工作站，根據(jù)實驗需求設置預熱溫度，通常為94-96℃。
2、裝載樣品：
將配制好的PCR反應混合液加入到PCR管中。
將PCR管放置在Opentrons Flex PCR工作站的樣品架上。
3、設置PCR循環(huán)參數(shù)：
在工作站的控制界面上，設置PCR擴增的循環(huán)參數(shù)，包括變性、退火和延伸的溫度和時間，以及循環(huán)次數(shù)。
參數(shù)設置需根據(jù)具體的實驗需求和目標DNA序列的特性進行優(yōu)化。

三、PCR擴增階段
1、變性步驟：
將反應器加熱至約93-98℃，保持一定時間（如20-30秒），使DNA雙鏈解離成單鏈。
2、退火步驟：
將溫度降至約50-65℃，保持一定時間（如20-40秒），使引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合。
3、延伸步驟：
將溫度升至DNA聚合酶的最適溫度（通常為72℃），保持一定時間（根據(jù)目標DNA片段的長度和DNA聚合酶的能力而定），使DNA聚合酶以dNTPs為原料，合成新的DNA鏈。
4、循環(huán)擴增：
重復上述變性、退火和延伸步驟，形成PCR擴增的循環(huán)。
通常一個PCR過程會使用25-35個循環(huán)，每循環(huán)一次，目標DNA片段的數(shù)量會翻倍。

四、擴增結束與結果分析階段
1、最終延伸：
在所有循環(huán)結束后，通常會在72℃下進行額外的延伸步驟，以確保所有未完成的DNA鏈都被充分延伸。
2、降溫與取出樣品：
擴增結束后，Opentrons Flex PCR工作站會自動降溫至4℃并保持，此時可以取出樣品。
3、結果分析：
通過凝膠電泳、實時熒光定量PCR等方法對PCR產(chǎn)物進行分析。
觀察電泳圖譜中的DNA條帶，判斷PCR擴增是否成功以及擴增產(chǎn)物的特異性和濃度。

五、實驗后處理與儀器維護階段
1、清理工作區(qū)：
實驗結束后，及時清理工作區(qū)域，避免交叉污染。
2、數(shù)據(jù)記錄：
記錄實驗結果，包括擴增曲線、電泳圖等，為后續(xù)實驗提供參考。
3、儀器維護：
定期對Opentrons Flex PCR工作站進行維護和校準，確保儀器的準確性和穩(wěn)定性。

Opentrons Flex PCR工作站的PCR擴增流程包括實驗準備、樣品裝載與儀器設置、PCR擴增、擴增結束與結果分析以及實驗后處理與儀器維護等多個階段。每個階段都需要仔細操作，以確保PCR擴增的準確性和可靠性。

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