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在生物醫(yī)學(xué)研究、藥物分析以及臨床診斷等領(lǐng)域,血漿樣品作為分析對象扮演著至關(guān)重要的角色。血漿,作為血液的液態(tài)部分,富含各種生物分子,包括蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、代謝物以及可能的藥物殘留等。然而,這些豐富的成分也帶來了分析上的挑戰(zhàn),因?yàn)槠渲械脑S多物質(zhì)都可能作為干擾因素,影響目標(biāo)分析物的準(zhǔn)確測定。因此,血漿樣品的前處理成為了確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠性和準(zhǔn)確性的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。
一、一般處理方法
1、抗凝搜集血漿:
搜集抗凝全血后,輕輕倒置以確保充分抗凝,然后可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再離心)。離心時(shí)應(yīng)選擇合適的離心力和時(shí)間,以避免溶血。
實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及枸櫞酸鈉,需根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇合適的抗凝劑。
2、低溫凍存:
分離出的血漿可以冷凍保存,但在解凍后如出現(xiàn)絮狀渾濁,應(yīng)離心去除后再進(jìn)行測定。
二、去除干擾物質(zhì)的方法
1、稀釋加熱法:
血漿用溶解水進(jìn)行3~10倍稀釋,然后在37~100℃水中進(jìn)行加熱處理,保溫時(shí)間一般在5~10分鐘。這種方法可以去除或降低某些熱敏性干擾物質(zhì)的含量。
2、氯仿提取法:
血漿加等量的氯仿后振動(dòng)一段時(shí)間(如3小時(shí)),然后取上層進(jìn)行檢測。氯仿能有效提取和分離出某些脂溶性干擾物質(zhì)。
3、乙醚處理法:
血漿加入乙醚處理并在適當(dāng)溫度下(如40℃)保溫,然后將乙醚去除。乙醚可以去除或降低血漿中的某些揮發(fā)性干擾物質(zhì)。
4、三氟代乙酸法:
血漿中加入乙酸調(diào)節(jié)pH至4.0,然后用K2HPO4調(diào)節(jié)pH到7~7.5。這種方法可以改變血漿的酸堿環(huán)境,從而影響某些干擾物質(zhì)的穩(wěn)定性和活性。
5、表面活性劑處理法:
類似于稀釋加熱法,但將稀釋用水改為表面活性劑。表面活性劑可以破壞血漿中的某些膜結(jié)構(gòu),釋放出被膜包裹的干擾物質(zhì)。
6、凝膠過濾法:
利用凝膠的分子篩作用,將血漿中的不同分子大小的物質(zhì)進(jìn)行分離。這種方法可以有效去除大分子干擾物質(zhì)。
7、堿性處理法:
血漿用一定濃度的堿液(如0.2N NaOH)在適當(dāng)溫度下(如37℃)保溫一段時(shí)間(如10分鐘),然后用酸液(如HCl)中和。堿性環(huán)境可以改變某些干擾物質(zhì)的化學(xué)性質(zhì),使其更易于去除或降低其活性。
8、Beads法:
將吸附特定干擾物質(zhì)的特殊樹脂(如吸附內(nèi)毒素的樹脂)放入血漿中,待其充分吸附后取出,再加入適當(dāng)?shù)脑噭┻M(jìn)行后續(xù)反應(yīng)。這種方法可以針對性地去除血漿中的特定干擾物質(zhì)。
三、針對特定目標(biāo)物的前處理方法
如果血漿樣品的前處理是為了測定某個(gè)特定目標(biāo)物(如弱堿性藥物),則可能需要采用更為針對性的前處理方法。例如:
1、使用三氯乙酸或高氯酸等沉淀血漿蛋白質(zhì),然后取上清液進(jìn)行后續(xù)處理。
2、調(diào)節(jié)pH值至弱堿性以使目標(biāo)藥物游離出來,再加入有機(jī)溶劑進(jìn)行提取和純化。
血漿樣品前處理是生物醫(yī)學(xué)研究、藥物分析及臨床診斷中不可或缺的一環(huán)。通過采用合適的前處理方法,我們能夠有效地去除或降低血漿中的干擾物質(zhì),保護(hù)并富集目標(biāo)分析物,從而為后續(xù)的實(shí)驗(yàn)分析提供高質(zhì)量的樣品。
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