Oscar Swindley 在謝菲爾德大學從事單克隆抗體折疊和組裝工作。他使用 Opentrons OT-2 移液機器人對細胞培養(yǎng)物進行滴度測定。

謝菲爾德大學是英國極具影響力的研究型大學之一，建校歷史悠久，在 2022 QS 世界大學排名第 95 名。Oscar Swindley 是謝菲爾德大學化學與生物工程系博士，從事單克隆抗體折疊和組裝工作。他使用Opentrons OT-2 移液機器人進行滴度測定以進行細胞培養(yǎng)開發(fā)。今天他將為大家分享他對 OT-2 的使用體驗。

Oscar Swindley 是謝菲爾德大學化學與生物工程系的博士生，合成生物學平臺開發(fā)團隊的一員。該實驗室于2019年8月購買了首臺 Opentrons OT-2，用于細胞培養(yǎng)開發(fā)的滴度測定自動化，Oscar 就是負責操作 OT-2 的深度用戶。

Opentrons: 請介紹一下您的研究背景？

Oscar Swindley:?我從事的研究方向是單克隆抗體折疊和組裝過程的遺傳及化學操作，以及自動化程序的優(yōu)化和集成。我們使用 OT-2 在我們的實驗室中執(zhí)行大量的細胞培養(yǎng)操作。我剛剛完成了我們的第一個大型篩選項目，其中所有細胞培養(yǎng)，轉(zhuǎn)染，樣品收集和滴度測定都在 OT-2 上進行。

Opentrons: 如何形容您在實驗室的一天？

OS:?最近我正在處理在 OT-2 上完成的第一次大規(guī)模細胞培養(yǎng)篩選的結果。我一直在使用 OT-2 進行滴度測定。OT-2 支持并簡化了整個流程。除此之外，我的常規(guī)日常工作包括在搖瓶和孔板上進行常規(guī)的細胞培養(yǎng)，以及在分子生物學實驗室進行其他實驗。

Opentrons: 您為什么選擇 OT-2？

OS:?在我們的實驗室引入 OT-2 的目的是提高我們平臺的可重復性。我們在實驗室使用 24 孔和 96 孔板進行高通量篩選。我們面臨的主要困難是轉(zhuǎn)染，因為當我們以非常高的密度重新懸浮細胞時，溶液會變得粘稠，細胞會迅速沉降。我們需要準確地把樣品分配到整個孔板上，以便在每個孔中種植相同數(shù)量的細胞。這是一個大量重復的過程，且處理的液體體積非常小。我們面臨的最大問題是如何在細胞隨著時間推移會逐漸沉降的情況下，始終保持液體充分混合并成功種植細胞。

Opentrons: 您具體使用 OT-2 做什么，它如何適應您的工作流程？

OS:?我們使用 OT-2 來設置和運行我們的96孔電轉(zhuǎn)染平臺，從多種培養(yǎng)板格式取樣，并執(zhí)行板基測定。特別是對于我們的電轉(zhuǎn)染平臺，OT-2 將 DNA、緩沖液和細胞結合在一起，然后將混合物分配到電轉(zhuǎn)染板中。轉(zhuǎn)染后，OT-2 進行稀釋、混合和為細胞提供養(yǎng)分，然后將其種入 24 孔培養(yǎng)板中。3 天后我們將用機器人對培養(yǎng)物進行測定。這包括混合和從培養(yǎng)板取樣進行各種下游測定。最后，OT-2 能夠?qū)颖炯虞d到玻璃片上，用于我們的高通量細胞計數(shù)器，并收獲上清液進行滴度分析。在最近的一組篩選實驗中，OT-2 幫助我們進行了 22 個電轉(zhuǎn)染板和相關的取樣。OT-2 只需 20 分鐘就能運行一次滴度分析，這太棒了。我可以全天讓機器人持續(xù)運行。

Opentrons: 使用你們的 OT-2 開始實驗是什么感覺？

OS:?我編寫第一個協(xié)議腳本大約花費了 2 個月的時間。但是腳本一旦完成，所有的信息都在腳本里，我就可以快速地繼續(xù)進行更復雜的實驗。我把我的所有腳本都上傳到了我的 GitHub 頁面上，如果有興趣的話，大家都可以去看看。

Opentrons: 在使用 OT-2 之前，您是否使用過其他實驗室自動化設備？

OS:?沒有。我以前使用過 BioMek，并設置了 SOP。為了更好地對 OT-2 進行編程，我在 8 月至 11 月期間學習了 Python。

Opentrons: 您還有關于 OT-2 的其他體會要跟大家分享的嗎？

OS:?總體來說這是一臺好設備，但它沒有安全保障裝置，也就是說，它無法識別障礙物，也無法意識到吸頭是否掉落。我們現(xiàn)在遇到的問題是如能能夠在故障發(fā)生時進行追蹤。另一個困難是設備與 24 孔板的兼容性不強，因此我不得不想辦法騙過它，方法是每隔一行取出吸頭。但是如果你知道如何編程控制機器人，你總是可以找到解決方案的。總的來說，我認為它非常適合用于研究，在你的每次實驗中你可以根據(jù)你的需求調(diào)整實驗方案。